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GMP无菌实验室的运行及管理

来源:    日期:2018-08-29 14:48:52    浏览量:
一、室内环境管理
无菌实验室设有无菌操作间、缓冲间和更衣间,无菌操作间洁净度达到10000级,超净台洁净度达到100级且室内温度应保持在20~24℃,湿度保持在45%~60%[1],此设置不仅满足人体舒适度且又不利于室内微生物的生存。初效、中效过滤器需要6个月更换1次,高效过滤器需要每年更换1次,以保证室内洁净度达到标准。紫外灯达到使用寿命会影响消毒灭菌的效果,应定期检查更换,同时应加强其他指标的监测,如洁净度、细菌菌落数、静压差和风量等。
二、物流管理
经过γ射线灭菌的细胞培养瓶、培养皿、移液管、离心管等用1000mg/L浓度的消毒液彻底擦拭器材表面,消毒后放置于传递窗中,紫外灯照射30min后方可带入实验室。高压消毒的器材如止血钳、治疗盘、离心套管等要用包布包裹2层,经高压蒸汽灭菌和烤箱烘干后使用。使用前应检查物品包裹内外各种监测指示剂是否符合要求,再决定使用。贮存器材可放入无菌室的柜橱内,若超过有效期应重新灭菌。进包装间要严格洗手,穿工作衣、戴口罩、帽子,包装前检查包布、治疗巾,应清洁干燥无破损,做到一用一洗一消毒,各类器材应光洁无锈、性能完好齐全。
外用3M化学指示胶带封贴并注明品名、包装者、查对者、灭菌期及有效使用期,各类灭菌包包扎应松紧适度、整齐,减少各种污染的机会。所有实验室器材需在最外层传递窗中用紫外灯照射30min后方可带入缓冲间。灭菌包需在缓冲间内剥去最外层包布后方可带入无菌操作间。在无菌操作间内剥去内层包布后摆放到固定位置备用。实验室内各种器材要排放有序,定期检查,补充基数。为保证洁净度,应严禁堆放杂物,以防污染。污敷料及垃圾废液等应分别放入专用废液缸和污物桶中,待操作完毕后移出实验室。彻底清洁室内物品及地面,减少污物在室内的停留时间。
对已污染或疑似污染培养基、细胞因子等应立即丢弃。实验室设定了单独的阳性工作区域,包括阳性无菌操作间、缓冲间和更衣间。阳性工作区域与阴性工作区域完全隔离,防止肝炎病毒通过血液及相关物品等感染阴性患者回输的细胞,防止患者通过细胞回输感染乙肝病毒。工作人员进入阳性区域后,不得再进入阴性区域,阳性间每次使用的洗手衣需加入1000mg/L浓度消毒液,洗涤晾干以备下次使用,每次进入阳性间所着一次性隔离衣在用后应弃于阳性间垃圾袋中,阳性液体污物应瓶装密封后放入阳性间医疗垃圾袋中。阳性医疗垃圾袋从阳性间的传递窗中传出,放入专用医疗垃圾桶中,由院内专人负责回收。
三、运行制度管理
工作人员于每次实验操作前30min打开实验室空气净化系统和紫外灯。如果实验室长期不用,需要在实验前3h打开空气净化系统,以提高空气洁净度。在潮湿季节使用时,打开紫外灯时间需适当延长,以加强消毒效果,保证实验质量。进入无菌实验室的人员要严格着装,穿着经严格高压蒸汽灭菌过的洗手衣、隔离衣、口罩、帽子及用10g/L过氧乙酸溶液浸泡后晾干的拖鞋。着装程序如下:进入第一更衣间后脱掉外衣换一更拖鞋;随即进入第二更衣间,穿戴经高压蒸汽灭菌的一次性口罩帽子,着洗手衣换二更拖鞋,带无菌橡胶手套;进入第三更衣间后着隔离服,换三更拖鞋,之后方可进入无菌操作间操作。
保持实验室相对密闭状态,严格控制人员进出,必要情况下需要工作人员互相沟通协调时,可通过房间对讲电话联络,将工作人员出入次数降到最低,减少不必要的涡流形成,使室内的气压始终处于正压状态。各项操作要集中,操作过程要轻稳,不能在实验室抖动衣物布类,以防止微粒在室间飞扬,保证室间空气的洁净。实验室人员进入无菌操作间应衣帽整洁、修剪指甲,严格执行无菌技术操作。一切操作必须在百级净化的超净工作台内进行,超净工作台在使用前需打开其紫外灯辐照灭菌30min以上,并同时打开超净工作台进行吹风。实验中应保持无菌操作,拿取物品不要跨过无菌面;培养瓶不要过早打开,对于已开瓶口者要尽量避免垂直放置;吸管等不能触及瓶口,以防细菌污染或细胞的交叉感染。每次操作过程中留取定量样品进行细菌、真菌、支原体检测,以检查无菌操作的可靠性及细胞是否污染。操作完毕后应及时清理无菌实验室。组织实验室全体人员进行理论学习,明确无菌实验室工作原理、环境要求,设置严格的工作流程,明确分工并强化责任技师有效的合作配合意识。
四、卫生清洁管理
清洁工作应在实验室空气净化系统运行中进行,清洁工具采用不掉纤维的织物材料制作。一切清洁工作必须采用湿式打扫,每周进行1次彻底清洁。需用1000mg/L含氯消毒液擦拭房间桌、椅、墙壁、天花板以及转凳、显微镜等固定在实验室内的物体。用体积分数为75%的酒精擦拭培养箱、超净台和紫外线灯管。地板很容易藏尘(如人体皮肤、毛发的脱落、布类的纤维等)、藏菌等,是室内的污染源,应在吸尘器吸除后用1000mg/L含氯消毒液擦拭。抽风、回风口也易藏尘、藏菌,应重点拆洗清洁,以确保尘埃过滤效果。卫生清洁时应用10g/L过氧乙酸溶液浸泡消毒工作人员所穿的拖鞋,待晾干后再使用。每周进行彻底清洁时应将实验室内物品如移液器、移液器枪头、止血钳、治疗盘以及离心机套管等进行高压蒸汽灭菌。清洁工作完成后,手术室净化系统继续运行时间一般不应少于30min。
 
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